Egy barátságtalan sivatagi régióban, tíz évvel a Raccoon City eseményei után a főhős Chris Redfield egy újabb rémálommal szembesül. Ám ebben a szembesülésben nem lesz egyedül. A Resident Evil 5-ben egy női karakter is feltűnik a Resident univerzumból, Rebecca Chambers néven.

A játék átvesz néhány mechanikát az előző, negyedik részből, ami azt jelenti, hogy ismét a főszereplő válla mögül nézzük a játékot. A játék mindenekelőtt a teljesen kidolgozott karakterekkel nyűgöz le, példátlan arckifejezésekkel és közel tökéletes hajviselettel. A környezetek is még interaktívabbak, mint korábban, és a húsevő, vírusfertőzött emberek tömegesen rontanak rád. De a nagyobb veszélyt jelentő támadással együtt jár a távolsági fegyverek és a speciális láb- és kézi csapások gazdagabb arzenálja is közelről.